Title
Ispitivanje senzitivnosti genoma kod pacijenata sa bolestima hromozomske nestabilnosti .
Creator
Ćirković, Sanja S. 1977-
Copyright date
2012
Object Links
Select license
Autorstvo-Nekomercijalno-Bez prerade 3.0 Srbija (CC BY-NC-ND 3.0)
License description
Dozvoljavate samo preuzimanje i distribuciju dela, ako/dok se pravilno naznačava ime autora, bez ikakvih promena dela i bez prava komercijalnog korišćenja dela. Ova licenca je najstroža CC licenca. Osnovni opis Licence: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/rs/deed.sr_LATN. Sadržaj ugovora u celini: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/rs/legalcode.sr-Latn
Language
Serbian
Cobiss-ID
Theses Type
Doktorska disertacija
description
Datum odbrane: 29.10.2012
Other responsibilities
mentor
Guć-Šćekić, Marija
član komisije
Milašin, Jelena 1957-
član komisije
Vuković-Gačić, Branka 1958-
Academic Expertise
Prirodno-matematičke nauke
University
Univerzitet u Beogradu
Faculty
Biološki fakultet
Alternative title
Genome sensitivity in patients with chromosomal instability disorders
Publisher
Beograd : [S. S. Ćirković]
Format
PDF/A (128 listova)
description
Biologija - Medicinska genetika / Biology - Medical genetics
Abstract (sr)
U cilju ispitivanja senzitivnosti genoma i potvrde klinički postavljene dijagnoze
bolesti hromozomske nestabilnosti, korišćeni su uzorci dve grupe pacijenata sa
kliničkom slikom: Fankonijeve anemije (FA) i Nijmegenovog sindroma nestabilnosti
(NSN) (eng. Nijmegen Breakage syndrome, NBS). Specifična hipersenzitivnost ćelija
obolelih od FA na diepoksibutan (DEB), odnosno kod obolelih od NSN na bleomicin
(BLC), iskorišćena je u diferencijalno dijagnostičke svrhe.
Studija je obuhvatila ukupno 100 pacijenata: 90/100 sa kliničkom slikom FA i
10/100 pacijenata sa kliničkim znacima NSN, koji su dijagnostikovani na Institutu za
zdravstvenu zaštitu majke i deteta Srbije „Dr Vukan Čupić“. U detekciji DEB-om
indukovane hromozomske nestabilnosti obolelih od FA primenjene su standardne
citogenetičke metode. Za potvrdu ili isključenje mozaičnog fenotipa FA korišćene su
dodatne metode: analiza oštećenja DNK komet testom i protočno citometrijska analiza
zastoja ćelija u G2 fazi ćelijskog ciklusa. Hromozomska osetljivost ćelija obolelih od
NSN je analizirana primenom bleomicinovog testa (BLC test). Molekularna analiza
prisustva ili odsustva c.657_661del5 mutacije u NBN genu obolelih od NSN, urađena je
korišćenjem modifikovane PCR metode uz analizu heterodupleksa.
Kod 11,11% (10/90) pacijenata pod sumnjom da boluju od FA (FA grupa),
otkrivena je povećana hromozomska osetljivost na DEB u odnosu na kontrolnu grupu
(Mann-Whitneyev test: p < 0,05), dok su kod 3,33% (3/90) pacijenata dobijene granične
vrednosti iste analize (FA* grupa). U cilju preciznijeg klasifikovanja pacijenata u FA
grupi, primenjen je indeks hromozomske fragilnosti. Na ovaj način je u FA grupi, kod
40% (4/10) pacijenata otkriven ćelijski fenotip FA nemozaičnog tipa, dok je kod 60%
(6/10) pacijenata dobijen mozaični odgovor na DEB. Kod svih pacijenata sa mozaičnim
fenotipom FA, kao i kod dva pacijenta sa graničnim vrednostima diepoksibutanovog
testa (DEB testa), daljim analizama primenom komet testa i analizom zastoja ćelija u
G2 fazi, potvrđena je dijagnoza FA.
U drugoj grupi od 10 bolesnika sa sumnjom da boluju od NSN analizirana je
BLC-om indukovana hromozomska nestabilnost, koja je bila povećana kod 40% (4/10)
pacijenata (NBS grupa). Kod 30% (3/10) pacijenata dobijeni rezultati su se preklapali sa
rezultatima kontrolne grupe (ne-NBS grupa), dok je kod preostala tri pacijenta analiza
bila neuspešna zbog slabog mitotskog indeksa. Molekularnim analizama je otkriveno
homozigotno prisustvo c.657_661del5 mutacije u NBN genu kod sva četiri pacijenta iz
NBS grupe, kao i kod tri pacijenta kod kojih je citogenetička analiza bila neuspešna, i
tako potvrđena konačna dijagnoza NSN.
Na osnovu dobijenih rezultata može se zaključiti da su analize korišćene u ovoj
studiji omogućile potvrdu klinički postavljene dijagnoze FA i NSN, što opravdava
njihovu dalju primenu u diferencijalnoj dijagnostici ovih oboljenja.
Abstract (en)
In order to determine the sensitivity of the genome and to confirm a clinical
diagnosis of chromosomal instability disorders, blood samples from patients with
clinical suspicion of Fanconi’s anemia (FA) and Nijmegen Breakage syndrome (NBS),
were collected for chromosome fragility evaluation by the diepoxybutane (DEB) and
bleomycin (BLC) tests.
The study considered a total of 100 patients: 90/100 with the hematological and/or
congenital phenotypic symptoms reminiscent of FA and 10/100 patients with clinical
features of NBS, all diagnosed at the Mother and Child Health Care Institute of Serbia
"Dr Vukan Čupić”. The DEB-induced chromosomal fragility analysis in patients with
FA symptoms was carried out by using standard cytogenetic methods. The additional
methods, such as: DNA damage analysis by comet assay and flow cytometric analysis
of G2 phase cell cycle arrest, were used in order to confirm FA phenotype in patients
with mosaic cytogenetic response to DEB. Chromosomal sensitivity of cells in patients
with NBS symptoms was analyzed using a BLC test. Molecular analysis for the
presence of the c.657_661del5 mutation in NBN gene in patients with NBS was carried
out using modified PCR method and heteroduplex analysis on PAGE gel.
In this study 11.11% (10/90) of patients with clinical suspicion of FA were found
to have an increased chromosomal sensitivity to DEB (FA group), comparing to healthy
controls (Mann-Whitney test: p < 0.05), while 3.33% (3/90) of patients showed
borderline results of the same analysis (FA* group). The chromosome fragility index
was used in order to provide a clear cut-off diagnostic level distinguishing FA mosaic
from other patients in the FA group. In this group, 40% (4/10) of FA patients revealed
non-mosaic FA phenotype, while the remaining 60% (6/10) of FA patients showed a
mosaic response to DEB. In all of FA mosaic patients, and two patients with borderline
DEB-sensitivity, further analyses were performed using comet assay and analysis of G2
phase cell cycle arrest, in order to confirm the diagnosis of FA.
In the second group of 10 patients with clinical suspicion of NBS, the cytogenetic
analysis revealed an increased chromosomal sensitivity to BLC in 40% (4/10) of them
(NBS group). The BLC-induced chromosome fragility values in 30% (3/10) of these
patients were overlapping those in the control group (non-NBS group). In the remaining
of three patients the cytogenetic analysis was unsuccessful, due to the low mitotic index.
Molecular analysis confirmed the presence of homozygous c.657_661del5 mutation in
all seven NBS patients, including three patients with unsuccessful cytogenetic analysis,
which confirmed the final diagnosis of NBS.
Based on these results it can be concluded that the analyses used in this study are
useful in confirmation of clinical diagnosis of FA and NBS, which justifies their further
application in the differential diagnosis of these two diseases.
Authors Key words
Fankonijeva anemija (FA), Nijmegenov sindrom nestabilnosti (NSN),
diepoksibutan (DEB), bleomicin (BLC), hromozomska nestabilnost, citogenetika,
komet test, analiza ćelijskog ciklusa, c.657_661del5 mutacija
Authors Key words
Fanconi’s anemia (FA), Nijmegen Breakage syndrome (NBS),
diepoxybutane (DEB), bleomycin (BLC), chromosomal fragility, cytogenetic, comet
assay, cell cycle, c.657_661del5 mutation
Classification
575.113:575.224 (043.3)
Subject
Bolesti hromozomske nestabilnosti
Type
Tekst
Abstract (sr)
U cilju ispitivanja senzitivnosti genoma i potvrde klinički postavljene dijagnoze
bolesti hromozomske nestabilnosti, korišćeni su uzorci dve grupe pacijenata sa
kliničkom slikom: Fankonijeve anemije (FA) i Nijmegenovog sindroma nestabilnosti
(NSN) (eng. Nijmegen Breakage syndrome, NBS). Specifična hipersenzitivnost ćelija
obolelih od FA na diepoksibutan (DEB), odnosno kod obolelih od NSN na bleomicin
(BLC), iskorišćena je u diferencijalno dijagnostičke svrhe.
Studija je obuhvatila ukupno 100 pacijenata: 90/100 sa kliničkom slikom FA i
10/100 pacijenata sa kliničkim znacima NSN, koji su dijagnostikovani na Institutu za
zdravstvenu zaštitu majke i deteta Srbije „Dr Vukan Čupić“. U detekciji DEB-om
indukovane hromozomske nestabilnosti obolelih od FA primenjene su standardne
citogenetičke metode. Za potvrdu ili isključenje mozaičnog fenotipa FA korišćene su
dodatne metode: analiza oštećenja DNK komet testom i protočno citometrijska analiza
zastoja ćelija u G2 fazi ćelijskog ciklusa. Hromozomska osetljivost ćelija obolelih od
NSN je analizirana primenom bleomicinovog testa (BLC test). Molekularna analiza
prisustva ili odsustva c.657_661del5 mutacije u NBN genu obolelih od NSN, urađena je
korišćenjem modifikovane PCR metode uz analizu heterodupleksa.
Kod 11,11% (10/90) pacijenata pod sumnjom da boluju od FA (FA grupa),
otkrivena je povećana hromozomska osetljivost na DEB u odnosu na kontrolnu grupu
(Mann-Whitneyev test: p < 0,05), dok su kod 3,33% (3/90) pacijenata dobijene granične
vrednosti iste analize (FA* grupa). U cilju preciznijeg klasifikovanja pacijenata u FA
grupi, primenjen je indeks hromozomske fragilnosti. Na ovaj način je u FA grupi, kod
40% (4/10) pacijenata otkriven ćelijski fenotip FA nemozaičnog tipa, dok je kod 60%
(6/10) pacijenata dobijen mozaični odgovor na DEB. Kod svih pacijenata sa mozaičnim
fenotipom FA, kao i kod dva pacijenta sa graničnim vrednostima diepoksibutanovog
testa (DEB testa), daljim analizama primenom komet testa i analizom zastoja ćelija u
G2 fazi, potvrđena je dijagnoza FA.
U drugoj grupi od 10 bolesnika sa sumnjom da boluju od NSN analizirana je
BLC-om indukovana hromozomska nestabilnost, koja je bila povećana kod 40% (4/10)
pacijenata (NBS grupa). Kod 30% (3/10) pacijenata dobijeni rezultati su se preklapali sa
rezultatima kontrolne grupe (ne-NBS grupa), dok je kod preostala tri pacijenta analiza
bila neuspešna zbog slabog mitotskog indeksa. Molekularnim analizama je otkriveno
homozigotno prisustvo c.657_661del5 mutacije u NBN genu kod sva četiri pacijenta iz
NBS grupe, kao i kod tri pacijenta kod kojih je citogenetička analiza bila neuspešna, i
tako potvrđena konačna dijagnoza NSN.
Na osnovu dobijenih rezultata može se zaključiti da su analize korišćene u ovoj
studiji omogućile potvrdu klinički postavljene dijagnoze FA i NSN, što opravdava
njihovu dalju primenu u diferencijalnoj dijagnostici ovih oboljenja.
“Data exchange” service offers individual users metadata transfer in several different formats. Citation formats are offered for transfers in texts as for the transfer into internet pages. Citation formats include permanent links that guarantee access to cited sources. For use are commonly structured metadata schemes : Dublin Core xml and ETUB-MS xml, local adaptation of international ETD-MS scheme intended for use in academic documents.