Title
Celulaze gljive Trichoderma harzianum: produkcija, kontrola produkcije i karakterizacija eksprimiranih enzima
Creator
Grujić, Marica M., 1986-
Copyright date
2016
Object Links
Select license
Autorstvo-Bez prerade 3.0 Srbija (CC BY-ND 3.0)
License description
Dozvoljavate umnožavanje, distribuciju i javno saopštavanje dela, bez promena, preoblikovanja ili upotrebe dela u svom delu, ako se navede ime autora na način odredjen od strane autora ili davaoca licence. Ova licenca dozvoljava komercijalnu upotrebu dela. Osnovni opis Licence: http://creativecommons.org/licenses/by-nd/3.0/rs/deed.sr_LATN Sadržaj ugovora u celini: http://creativecommons.org/licenses/by-nd/3.0/rs/legalcode.sr-Latn
Language
Serbian
Cobiss-ID
Committee report
Theses Type
Doktorska disertacija
description
Datum odbrane: 01.12.2016.
Other responsibilities
mentor
Vujčić, Zoran, 1960-
član komisije
Dojnov, Biljana
član komisije
Beškoski, Vladimir
član komisije
Duduk, Bojan, 1976-
Academic Expertise
Prirodno-matematičke nauke
Academic Title
-
University
Univerzitet u Beogradu
Faculty
Hemijski fakultet
Alternative title
Cellulases of fungus Trichoderma harzianum: production, control of production and characterization of the expressed enzyme
Publisher
[M. M. Grujić]
Format
145, 7 listova
description
Hemija - Biohemija / Chemistry
- Biochemistry
Abstract (sr)
Ova disertacija se bavi ispitivanjem mogućnosti primene izolata gljive roda
Trichoderma harzianum za produkciju enzima celulaznog kompleksa, optimizacijom
uslova za njihovu produkciju upotrebom otpadnih lignoceluloznih materijala, ispitivanjem
mehanizma kontorole produkcije i karakterizacijom produkovanih celulaznih enzima.
Razvijen je brz i pouzdan test za selekciju endocelulaznih hiperprodukujućih
izolata Trichoderma spp., koji je korišćen za analizu sto Trichoderma spp. izolata.
Obećavajući produceri su identifikovani do nivoa vrste. Najbolji producer endocelulaza je
identifikovan kao Trichoderma guizhouensis (UB483FTH2) iz grupe T. harzianum i
korišćen je za produkciju celulaznih enzima.
Optimizovani su uslovi za produkciju celulaznog kompleksa enzima u uslovima
tečne fermentacije upotrebom slame kao inducibilnog supstrata. Maksimalna produkcija
endocelulaza (28,32 U/g) je dobijena u 3 danu fermentacije, egzocelulaza (0,049 U/g)
nakon 5 dana fermentacije i β-glukozidaza (14,1 U/g) u 7 danu fermentacije.
Razvijena je zimogramska metoda za istovremenu detekciju različitih klasa
celulaznih izoformi, nakon izoelekrofokusiranja. β-glukozidaze su detektovane nakon
printovanja na nitroceluloznoj membrani upotrebom eskulina. Endocelulaze su
detektovane na poliakrilamidnom gelu sa koopolimerizovanom karboski metil celulozom,
dok su egzocelulaze detektovane upotrebom 4-metilumberiferil-β-D-celobiozida kao
supstrata.
Ispitana je i upotreba iskorišćenog komposta šampinjona kao novog supstrata za
produkciju celulaznih enzima gajenjem 6 izolata Trichoderma spp. Produkovana je
značajna količina endocelulaza i β-glukozidaza, uz istovremeno smanjenje početnog
supstrata za 30%.
Mehanizam regulacije produkcije celulaznih proteina izolata UB483FTH2 je
analiziran korelisanjem nivoa transkribovane iRNA za gene xyr1 i lae1, regulatora
produkcije celulaza, sa produkcijom svih celulaznih enzima. Pronađeno je da eksprimirani
geni, xyr1 i lae1, imaju pozitivan uticaj na produkciju celulaznih enzima i proteina.
Abstract (en)
This thesis examines application of isolates of Trichoderma harzianum for
production of cellulase enzyme complex, optimization of their production using
lignocellulose waste materials, studying of control mechanisms for production and
characterization of the produced cellulases enzymes.
Fast and reliable test for the selection of endocellulase hyper-producing isolates of
Trichoderma spp. has been developed and used for screening one hundred isolates of
Trichoderma spp. The promising isolates have been isolated to species level. The best
endocellulase producer is identified as Trichoderma guizhouensis (UB483FTH) which
belongs to the Trichoderma harzianum species complex. This strains was used for
production of cellulase enzyme complex.
Cellulase production was optimized using wheat straw as a substrate in conditions
of submerged fermentation. Maximum of endocelullase production (28.32 U/g) was
obtained in 3rd days of fermentation, exocellulase (0.049 U/g) after 5th days and β-
glucosidase (14.1 U/g) in 7th days of fermentation.
Reliable zymographic method for simultaneous characterization of cellulolytic
complex enzymes after isoelectric focusing has been developed. β-glucosidase is detected
after printing on nitrocellulose membrane using esculin as substrate. Endocellulase was
detected on polyacrilamide gel with copolymerized carboxymethyl-cellulose and
exocellulase were detected using 4-metillumberiferil-β-D-celobioside as a substrate.
Reuse of spent mushroom compost as a new substrate for the production of
cellulase enzymes by 6 isolates Trichoderma spp. was examined here too. Significant
amount of endocellulase and β-glucosidase were produced, while the amount of initial
substrate decreased by 30%.
The regulation mechanism of protein production of isolate UB483FTH2 analysed
as a correlation of transcribed level of mRNA for genes xyr1 and lae1 as a regulators of
production of cellulase enzymes. It was found that expressed genes xyr1 and lae1 have a
positive effect on the production of cellulases proteins and total proteins.
Authors Key words
Trichoderma harzianum, selekcija, zimogram, optimizacija,
xyr1, lae1, iskorišćeni kompost šampinjona
Authors Key words
cellulases, Trichoderma harzianum, screening, zymogram,
optimization, xyr1, lae1,spent mushroom compost
Classification
547.9:577.151.5(043.3)
Type
Tekst
Abstract (sr)
Ova disertacija se bavi ispitivanjem mogućnosti primene izolata gljive roda
Trichoderma harzianum za produkciju enzima celulaznog kompleksa, optimizacijom
uslova za njihovu produkciju upotrebom otpadnih lignoceluloznih materijala, ispitivanjem
mehanizma kontorole produkcije i karakterizacijom produkovanih celulaznih enzima.
Razvijen je brz i pouzdan test za selekciju endocelulaznih hiperprodukujućih
izolata Trichoderma spp., koji je korišćen za analizu sto Trichoderma spp. izolata.
Obećavajući produceri su identifikovani do nivoa vrste. Najbolji producer endocelulaza je
identifikovan kao Trichoderma guizhouensis (UB483FTH2) iz grupe T. harzianum i
korišćen je za produkciju celulaznih enzima.
Optimizovani su uslovi za produkciju celulaznog kompleksa enzima u uslovima
tečne fermentacije upotrebom slame kao inducibilnog supstrata. Maksimalna produkcija
endocelulaza (28,32 U/g) je dobijena u 3 danu fermentacije, egzocelulaza (0,049 U/g)
nakon 5 dana fermentacije i β-glukozidaza (14,1 U/g) u 7 danu fermentacije.
Razvijena je zimogramska metoda za istovremenu detekciju različitih klasa
celulaznih izoformi, nakon izoelekrofokusiranja. β-glukozidaze su detektovane nakon
printovanja na nitroceluloznoj membrani upotrebom eskulina. Endocelulaze su
detektovane na poliakrilamidnom gelu sa koopolimerizovanom karboski metil celulozom,
dok su egzocelulaze detektovane upotrebom 4-metilumberiferil-β-D-celobiozida kao
supstrata.
Ispitana je i upotreba iskorišćenog komposta šampinjona kao novog supstrata za
produkciju celulaznih enzima gajenjem 6 izolata Trichoderma spp. Produkovana je
značajna količina endocelulaza i β-glukozidaza, uz istovremeno smanjenje početnog
supstrata za 30%.
Mehanizam regulacije produkcije celulaznih proteina izolata UB483FTH2 je
analiziran korelisanjem nivoa transkribovane iRNA za gene xyr1 i lae1, regulatora
produkcije celulaza, sa produkcijom svih celulaznih enzima. Pronađeno je da eksprimirani
geni, xyr1 i lae1, imaju pozitivan uticaj na produkciju celulaznih enzima i proteina.
“Data exchange” service offers individual users metadata transfer in several different formats. Citation formats are offered for transfers in texts as for the transfer into internet pages. Citation formats include permanent links that guarantee access to cited sources. For use are commonly structured metadata schemes : Dublin Core xml and ETUB-MS xml, local adaptation of international ETD-MS scheme intended for use in academic documents.