Title
Примена електронске парамагнетне резонантне спектроскопије за испитивање коформационих промена албумина методом спинског обележавања
Creator
Pavićević, Aleksandra A., 1988-
Copyright date
2018
Object Links
Select license
Autorstvo-Nekomercijalno-Bez prerade 3.0 Srbija (CC BY-NC-ND 3.0)
License description
Dozvoljavate samo preuzimanje i distribuciju dela, ako/dok se pravilno naznačava ime autora, bez ikakvih promena dela i bez prava komercijalnog korišćenja dela. Ova licenca je najstroža CC licenca. Osnovni opis Licence: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/rs/deed.sr_LATN. Sadržaj ugovora u celini: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/rs/legalcode.sr-Latn
Language
Serbian
Cobiss-ID
Theses Type
Doktorska disertacija
description
Datum odbrane: 27. 09. 2018.
Other responsibilities
mentor
Mojović, Miloš, 1973-
član komisije
Mojović, Miloš, 1973-
član komisije
Popović-Bijelić, Ana, 1976-
član komisije
Petković, Marijana.
Academic Expertise
Prirodno-matematičke nauke
Academic Title
-
University
Univerzitet u Beogradu
Faculty
Fakultet za fizičku hemiju
Alternative title
Application of electron paramagnetic resonance spectroscopy in the study of albumin conformational changes by spin-labeling method
Publisher
[А. Павићевић]
Format
132 листа
description
Физичка хемија - Биофизичка хемија / Physical chemistry - Biophysical chemistry
Abstract (sr)
Серумски албумин је најзаступљенији протеин у крвној плазми, који има
више важних физиолошких функција, због чега је детаљно проучаван разним
техникама. Једна од техника коришћених за проучавање конформационих
промена албумина и његовог капацитета за везивање разних супстанција је
електронска парамагнетна резонантна (ЕПР) спектроскопија у спрези са спинским
обележавањем. У ту сврху је коришћено неколико различитих спинских
обележивача, међу којима су спински обележене масне киселине, с обзиром на то
да је албумин главни транспортер масних киселина. Други често коришћени
обележивач је 3-малеимидо проксил (5-МСЛ) који се ковалентно везује за
слободан цистеин.
У овој докторској дисертацији две спински обележене стеаринске киселине
које садрже парамагнетну доксил групу (група од које потиче ЕПР сигнал) на
петом (5-доксил стеаринска киселина, 5-ДС) и на шеснаестом (16-доксил
стеаринска киселина, 16-ДС) угљениковом атому метиленског ланца су
коришћене за проучавање конформационих промена у хуманом серумском
албумину (ХСА). Осим тога, конфомационе промене у говеђем серумском
албумину (БСА) су проучаване обележавањем БСА са 5-МСЛ. Конформационе
промене су биле индуковане варирањем температуре и pH, додавањем етанола,
везивањем неколико лиганада типичних за албумин (масне киселине и лекови) и
излагањем дејству јаких оксидујућих агенаса, водоник-пероксиду и
супероксидном анјонском радикалу. Додатни циљ ове дисертације је био да се
испита да ли 5-МСЛ може да се користи за детекцију суптилних конформационих
промена узрокованих везивањем лиганада, с обзиром на то да се 5-МСЛ налази у
ригидној средини када се веже за једини слободан цистеин у БСA који се налази
на позицији 34 у аминокиселинској секвенцији (Cys-34).
Резултати ове дисертације показују да су доксил групе обележивача 5-ДС и
16-ДС (које дају информације о променамa у својој околини), лоциране на
различитим местима у ХСА. Наиме, доксил група 5-ДС се налази у хидрофобној
унутрашњости ХСА, док је за 16-ДС лоцирана близу површине ХСА или чак
пролази кроз њу. Стога, ова два једињења дају информације са различитих места
на молекулу ХСА. Такође је уочено да ЕПР спектри оба ДС обележивача везаних
за ХСА могу да се разложе на компоненте које одговарају јако (ЈВ), слабо везаном
(СВ) и невезаном (НВ) обележивачу. За 5-МСЛ везан за БСА, показано је да се
ЕПР спектри састоје из две компоненте, ЈВ и СВ, које потичу од 5-МСЛ везаног за
Cys-34 и амино групе, респективно...
Abstract (en)
Serum albumin is the most abundant blood plasma protein, which has been
thoroughly studied using a plethora of techniques, due to its multiple important
physiological roles. One of the methods used to monitor albumin conformational
changes and binding capacity is electron paramagnetic resonance (EPR) spin-labeling
methodology. For this purpose, albumin has been studied using various spin-labels,
among which spin-labeled fatty acids have been the most commonly employed, since
albumin is the main carrier of fatty acids. The other frequently used spin-label is 3-
maleimido-proxyl (5-MSL) which binds covalently to the free cysteine residues.
In this doctoral dissertation, two spin-labeled stearic acids containing a
paramagnetic doxyl group (the EPR-active group) attached at fifth (5-doxyl-stearic acid,
5-DS) and sixteenth (16-doxyl stearic acid, 16-DS) carbon atom of the methylene chain,
were used to study the conformational changes of human serum albumin (HSA).
Furthermore, conformational changes of bovine serum albumin (BSA) were studied by
labeling BSA with 5-MSL. The conformational changes were induced by varying
temperature and pH, addition of ethanol, binding several typical ligands (fatty acids and
drugs) and exposure to strong oxidizing agents, hydrogen peroxide and superoxide
anion radical. The additional goal of this dissertation was to reveal whether 5-MSL can
be used to track subtle conformational changes arising from ligand binding, since 5-
MSL is located in the fairly rigid environment when bound to the single free cysteine
residue in BSA, located at the position 34 in amino acid sequence (Cys-34).
The results from this study show that the doxyl groups (group which reports the
changes in its environment) of 5-DS and 16-DS, are located at different sites in HSA.
Namely, doxyl group of 5-DS is located in the hydrophobic interior, while for 16-DS it
is close to, or even protrudes the surface of HSA. Hence, these two compounds give
information from the different locations in HSA molecule. It was also observed that
EPR spectra of both DS spin-labels bound to HSA could be decomposed into
components corresponding to the strongly (SB), weakly bound (WB) and unbound (UB)
label. In case of 5-MSL bound to BSA, it was shown that the corresponding EPR
spectra consist of SB and WB component which originate from 5-MSL bound to Cys-34
and amino groups, respectively...
Authors Key words
албумин, ХСА, БСА, конформационе промене, спинско
обележавање, ЕПР спектроскопија
Authors Key words
albumin, HSA, BSA, conformational changes, spin-labeling, EPR
spectroscopy
Classification
544.122.4:577.112.82(043.3)
Type
Tekst
Abstract (sr)
Серумски албумин је најзаступљенији протеин у крвној плазми, који има
више важних физиолошких функција, због чега је детаљно проучаван разним
техникама. Једна од техника коришћених за проучавање конформационих
промена албумина и његовог капацитета за везивање разних супстанција је
електронска парамагнетна резонантна (ЕПР) спектроскопија у спрези са спинским
обележавањем. У ту сврху је коришћено неколико различитих спинских
обележивача, међу којима су спински обележене масне киселине, с обзиром на то
да је албумин главни транспортер масних киселина. Други често коришћени
обележивач је 3-малеимидо проксил (5-МСЛ) који се ковалентно везује за
слободан цистеин.
У овој докторској дисертацији две спински обележене стеаринске киселине
које садрже парамагнетну доксил групу (група од које потиче ЕПР сигнал) на
петом (5-доксил стеаринска киселина, 5-ДС) и на шеснаестом (16-доксил
стеаринска киселина, 16-ДС) угљениковом атому метиленског ланца су
коришћене за проучавање конформационих промена у хуманом серумском
албумину (ХСА). Осим тога, конфомационе промене у говеђем серумском
албумину (БСА) су проучаване обележавањем БСА са 5-МСЛ. Конформационе
промене су биле индуковане варирањем температуре и pH, додавањем етанола,
везивањем неколико лиганада типичних за албумин (масне киселине и лекови) и
излагањем дејству јаких оксидујућих агенаса, водоник-пероксиду и
супероксидном анјонском радикалу. Додатни циљ ове дисертације је био да се
испита да ли 5-МСЛ може да се користи за детекцију суптилних конформационих
промена узрокованих везивањем лиганада, с обзиром на то да се 5-МСЛ налази у
ригидној средини када се веже за једини слободан цистеин у БСA који се налази
на позицији 34 у аминокиселинској секвенцији (Cys-34).
Резултати ове дисертације показују да су доксил групе обележивача 5-ДС и
16-ДС (које дају информације о променамa у својој околини), лоциране на
различитим местима у ХСА. Наиме, доксил група 5-ДС се налази у хидрофобној
унутрашњости ХСА, док је за 16-ДС лоцирана близу површине ХСА или чак
пролази кроз њу. Стога, ова два једињења дају информације са различитих места
на молекулу ХСА. Такође је уочено да ЕПР спектри оба ДС обележивача везаних
за ХСА могу да се разложе на компоненте које одговарају јако (ЈВ), слабо везаном
(СВ) и невезаном (НВ) обележивачу. За 5-МСЛ везан за БСА, показано је да се
ЕПР спектри састоје из две компоненте, ЈВ и СВ, које потичу од 5-МСЛ везаног за
Cys-34 и амино групе, респективно...
“Data exchange” service offers individual users metadata transfer in several different formats. Citation formats are offered for transfers in texts as for the transfer into internet pages. Citation formats include permanent links that guarantee access to cited sources. For use are commonly structured metadata schemes : Dublin Core xml and ETUB-MS xml, local adaptation of international ETD-MS scheme intended for use in academic documents.